6m naoh recept na plněné
CNA - Kompozice a metody pro výrobu kompozice - Patenty Google
Na
obrázku 1A-1B je prezentována sekvence nukleotidů části expresní kazety molekuly CTLA4-Ig (SEQ ID NO:1). Rovněž je zobrazena sekvence aminokyselin (SEQ ID NO:2) touto molekulou nukleové kyseliny, která může obsahovat sekvenci aminokyselin: (i) SEQ ID NO:2, (ii) , (iii) , (iv) , (v) SEQ ID NO:2 a (vi) SEQ ID NO:2 SEQ ID NO:2 SEQ ID NO:2 SEQ ID NO:2 SEQ ID NO:2 molekulou CTLA4-Ig této expresní kazety Výroba s následující sion kazetou obsahuje následující zónu: (a) sekvence signálu onkostatinu M (nukleotid SEQ ID NO:1; Aminokyselina / SEQ ID NO:2); b) ektodoména lidského CTLA 4 (nukleotid SEQ ID NO:1; Aminokyselina SEQ ID NO:2); (c) modifikovaná část konstantní oblasti lidského IgG1 (nukleotid SEQ ID NO:1; Amino kyselina/11 SEQ ID NO:2), zahrnují modifikovanou oblast závěsu (nukleotid SEQ ID NO:1; Aminokyselina/11 SEQ ID NO:2), modifikované lidské IgG1 C H 2 strukturní domény (nukleotid SEQ ID NO:1; Aminokyselina/11 SEQ ID NO:2) a lidský IgG1 C H 3 strukturní domény (nukleotid SEQ ID NO:1; Aminokyselina SEQ ID NO:2).
Obr. 2 představuje odpovídající CTLA4 A29YLE Nukleová kyselina -Ig (horní řada) a aminokyseliny (spodní řádek) aminokyseliny, kterou sekvence aminokyselin obsahuje ze sekvence znázorněné na obr. 1 se mění, přičemž s druhem srovnání SEQ ID NO:2 se popsaná variace nachází na 29. (A až Y) a th (L až E), kde methionin (Met) (M) začíná číslování zbytku aminokyselin z označení "+1 ". CTLA4 A29YLE Nukleotidová sekvence -Ig je znázorněna na tomto obrázku a A, která se nachází od 79. (že je, pod M na pozici značky "+1") začíná na pozici A na místech nukleotidové pozice (SEQ ID NO:3). Zejména kódování CTLA4 A29YLE Nukleotidová sekvence -Ig je od nukleotidu v místech nukleotidu do 79., nazývaná podle SEQ ID NOBe zobrazené v celé délce nukleotidové sekvence nazývané po SEQ ID NO na obr. 2, a zahrnuje nukleotidovou sekvenci kódující signální peptid onkostatinu M.
Na obr. 3 je prezentován CTLA4, který obsahuje presekvenci onkostatinu M (s odkazem na runovou kurzívu) A29YLE Aminokyselinová sekvence molekuly Ig (SEQ ID NO:4). To může produkovat je CTLA4 A29YLE Polypeptid molekuly Ig obsahuje molekulu sekvence aminokyselin s následujícím zbytkem: (i) SEQ ID NO:4, (ii) , (iii) , (iv) , (v) SEQID NO:4 a (vi) SEQ ID NO:4 of SEQ ID NO:4 of SEQ ID NO:4 of SEQ ID NO:4 of SEQ ID NO
Obr. 4 je CTLA4, že 2 substituce aminokyselin (LE a A29Y) provádění v místě glykosylace vázané na N (N76, N a N), CC disulfidová vazba a strukturní doména CTLA-4 ukazují model A29YLE -Ig.
Obr. 5 představuje CTLA4 A29YLE Teoretická sekvence cDNA deutero-aminokyseliny (SEQID NO:4) substitucí aminokyselin Ig.2 prováděných (LE a A29Y) v ektodoméně CTLA-4 za vzniku signálního peptidu CTLA4 A29YLE této sekvence Identifikace onkostatinu M (presekvence) je spolu s N vázaným glykosylačním místem.
Obr. 6 popisuje CTLA4 A29YLE Vázané grafické znázornění anti-humánního IgG Fc vzorku Ig-Ig a kozy 4 A29YLE Kombinace vzorku -Ig se měří odpovědí na získání a je detekována porovnáním s povrchem senzorového čipu nemodifikovaného na tomto povrchu.3 druhy různých CTLA4 různých šarží expresí A29YLE -Ig vzorek.
Obr. 7 je grafické znázornění, které ukazuje zdánlivou molekulovou hmotnost, popsanou zdánlivou molekulovou hmotnost odpovídá polymeru, tetrameru nebo dimerové frakci odstraňovacího píku (čisticího píku) jako CTLA4-Ig HIC, který prochází 2 překryvnými měřeními po SEC, a popsaným 2 krytem po SEC s retenčním časem při dynamické detekci rozptylu světla (DSL) a SEC.
Obr. 8 A (nahoře) a 8B (dole) ukazují z HIC a odstraňují reprezentativní IEF gel, který odděluje pík s frakcí glykosylační molekuly CTLA4-Ig (obsahující monomer SEQ ID NO:2) aplikace vzorku vrchního gelu je ve správném pořadí: plavecká dráha 1, značka pI (Amersham); Plavecká dráha 2, standard dimeru CTLA4-Ig; Plavecká dráha 3, Albuminový eluát; Plavecká dráha 4, polymer; Plavecká dráha 5, tetramer; Plavecká dráha 6, aplikace vzorku gelu ze dna je ve správném pořadí: plavecká dráha 1, značka pI (Amersham); Plavecká dráha 2, plavecká dráha 2, standard dimeru CTLA4-Ig; Plavecká dráha 3, tetramer; Plavecká dráha 4, disociovaný malý obrázek ukazuje, že tetramer je stále méně sialylovaný než dimer.
Obr. 9 je prezentován na relativním množství, které zahrnuje pozorovanou dominantní strukturu sacharidů a sacharidů na monomerním dimeru CTLA4-Ig SEQ ID NOAmino-acid reziduí mezi tímto číslem je v rozporu se SEQ ID NOPokud aby bylo číslování zbytků aminokyselin na tomto obrázku konzistentní se SEQID NO: 2, je třeba číslování zvýšit o 26, tj. N 76 Be N
Obrázek 10 má v úmyslu nechat prázdné
Demonstrace na obrázku 11 obsahuje SEQ ID NO:2 dimerní zástupce IEF gel monomerního CTLA4-Ig (pH). Plavecká dráha 1 a 5 ukazuje kalibrační kritérium a plavecká dráha 2,3,4 ukazuje 20 μ g/ μ l CTLA4-Ig dimery samostatně.
Demonstrace na obrázku 12 zahrnuje monomerní CTLA4 SEQ ID NO:4 A29YLE Dimerní zástupce IEF gel z-Ig (pH). Plavecká dráha 1 a 8 ukazuje kalibrační kritérium a plavecká dráha ukazuje 10 μ g/ μ l CTLA4 samostatně A29YLE-Ig dimer.
Obrázek 13 ukazuje přehled sacharidů spojení N monomerní kolonie molekuly CTLA4-Ig obsahující SEQ ID, NOUse LC/MS PGC N spojení oligosacharidů technologie pro sběr sacharidů a separaci od togramu poskytuje přehled kolonie o každém místě připojení N. A) z Asn T5 peptidu 76 (Asn ze SEQ ID NO:2 ) sacharidu a B) z Asn z T7 peptidu (Asn SEQ ID NO:2 ) sacharidu, všechny být prezentovány při distribuci v jediném a jak sialylovaném druhu. C) z Asn peptidu T14 (Asn SEQ ID NO:2 ) formou podle druhu základní asializace převažující. D) ukazují distribuci, která spojuje sacharidy kolem N molekuly CTLA4-Ig. E) ukazují hlavní pík ze zvoleného původního spektra peptidu T5 odpovídající struktuře popsaného páru monosialylovaných spárovaných spárovačů. F) odejměte hlavní pík siaické struktury ze zvoleného původního spektra demonstrace T14 odpovídající dvěma spárovým tělesům. G) méně důležitý druh píku spoluelutu vybraného původního spektra se tvoří s minutami času a popsaný méně důležitý druh odpovídá struktuře trojspárového druhu ve vrcholu, kdy H) vybrané původní spektrum je odhaleno v minutách, popsaný hlavní druh odpovídá struktuře dvou spárových dvojitých částic.
Obrázek 14 A-B je uveden na UV a značka tepen a žil TIC, která spojuje přehled oligosacharidů pod požadavkem na kyselou eluci (% TFA) z monomerního N CTLA4-Ig SEQ ID NO:2 PGC tepen a žil značka na obrázku 14 A je uvedena pod požadavkem na eluci kyselinou (% TFA), celkový součet záporně nabitých iontů (TIC) o tepnách a žilách PGC na obrázku 14 B je uveden pod požadavkem na eluci kyseliny (% TFA) o chromatogramu PGC na značce tepen a žil v místě UV při nm.
Obrázek 15 A-B je uveden při požadavku na alkalickou eluci (%NH 4 OH) UV a značka tepen a žil TIC, které se připojují k oligosacharidům přehled níže z monomerního N CTLA4-Ig SEQ ID NO:2 PGC tepen a žil značka na obrázku 15 A je uvedena při požadavku na alkalickou eluci (%NH 4 OH) pod přibližně záporně nabitým celkovým součtem iontů (TIC) PGC tepen a žil na obrázku 15 B je prezentován při požadavku na alkalickou eluci (%NH 4 OH) pod přibližně chromatogramem PGC při UV při nm místě arterie a žilní značky.
Obrázek 16 představuje soubor CTLA4 SEQ ID NO:4 A29YLE Srovnání N spojení oligosacharidů přehled sacharidů z-Ig e 4 druhy oligosacharidové struktury teritorií: strukturní doména I zahrnuje druh asialoizace a doména II, III a IV zahrnují mono-sialylace, double-sialylated a tři sialylované druhy chromatografický režim samostatné oligosacharidy a hmotnostní spektroskopií na jeho strukturní doménu, která prováděla stanovení testu.
Obrázek 17 ukazuje přehled HPAEC-PAD oligosacharidů spojení, které obsahují monomerní molekulu CTLA4-Ig SEQ ID NOStrukturální doména má ukázat kumulativní pořadí obsahu kyseliny sialové v uralové doméně I, II, III a IV a mají 0,1,2 a 3 značku píku oligosacharidů sialového oligosacharidu, je reprezentována specifikovanou oligosacharidovou strukturou analýzy profilu HPAEC-PAD vrcholem sběru z profilové struktury sacharidů PGC Struktura je identifikována v souladu s předchozí mensurací.
Obrázek 18 AB ukazuje přehled PGC, který obsahuje monomerní molekulu CTLA4-Ig SEQ ID NOTtento přehled pochází z přímé injekce směsi přípravku pro trávení sacharidů, jak je popsáno v příkladu 3: injekce způsobuje detekci struktury P vymývání v době sialylované struktury P nepozorujte v přehledu izolačních oligosacharidů před injekcí.
Obrázek 19 představuje segmentální LC/MS monomerního T9 SEQ ID NO:2 a jde o pozitivní spektrum elektrospreje flatung (dekonvoluovaný). Toto spektrum ilustruje 3 druhy hlavního O a spojuje spektrum, například chápe, že má a O spojovací strukturu (GalNAc) 1 (Gal) 1 (NeuAc) 1 Základní peptid konzistentního cukru vzhledem k netučně zvýrazněné části tohoto spektra, tučně zvýrazněné části tohoto spektra posílil 10 krát a například chápe, že má (GalNAc) 1 (Gal) 1 (NeuAc) 2 (GalNAc) 1 (GlcNAc) 1 (Gal) 2 (NeuAc) 2 2 druhy dalších O spojovacích struktur.
Obrázek 20 ukazuje bod připojení a relativní kolonii sacharidové struktury spojení O řetězce CTLA4-Ig s SEQ ID NO:2 sekvence v množství na každém místě ukazuje data, která byla vyrobena 2 druhy nebo více kvadraturní technikou a implementuje pozici kovalence cysteinylizace je také popsána.
Obrázek intersticiálních granulí piLN-huCTLA4-Ig na obrázku 21 plazmidu zahrnoval sekvenci (tj. SEQ ID NO:1) lidského CTLA 4 z může kódovat-Ig molekuly (huCTLA4-Ig) postranní kloubní restrikční enzymy HindIII a XbaI.
Obrázek 22 popisuje obrázek plazmidového plazmidu obsahujícího lidský CTLA 4 kódování plechovky A29YLE Sekvence molekuly Ig (tj. SEQ ID NO:4).
Na obrázku 23 je fotografie techniky jižního blottingu DNA, která se extrahuje z vaječníků celI čínského křečka a popsaná exprese cho buněk je odvozena z 1DA1 (například klon 17) Plavecká dráha expresního gelu CTLA4-Ig zleva doprava je: plavecká dráha M, značka molekulárního množství DNA; Plavecká dráha N, CHO DNA (5 mg) netransfekovaného trávení EcoRI / XbaI; Plavecká dráha 1, CHO DNA ( μ g)+1ng pcSDhuCTLA4-Ig netransfekovaného EcoRI / XbaI digesce; Plavecká dráha 2, CHO DNA (μ g)+ng pcSDhuCTLA4-Ig netransfekovaného trávení EcoRI / XbaI; Plavecká dráha 3, CHO DNA ( μ g)+ngpcSDhuCTLA4-Ig netransfekovaného EcoRI / XbaI digesce; Plavecká dráha 4, CHO DNA ( μ g)+ng pcSDhuCTLA4-Ig netransfekovaného trávení EcoRI / XbaI; Plavecká dráha 5, CHO DNA (μ g)+ng pcSDhuCTLA4-Ig netransfekovaného EcoRI/XbaI trávení; Plavecká dráha 6, CHO DNA (μ g)+ng pcSDhuCTLA4-Ig netransfekovaného EcoRI / XbaI digesce; Plavecká dráha 7, DNA:MCB (μ g) trávení EcoRI/XbaI; Plavecká dráha 8, DNA:EPCB číslo šarže CA (μ g) rozkladu EcoRI/XbaI; Plavecká dráha 9, DNA:EPCB číslo šarže CA (μ g) rozkladu EcoRI/XbaI; Plavecká dráha 10, DNA:EPCB číslo šarže CA (μ g) rozkladu EcoRI/XbaI; Plavecká dráha 11, DNA:MCB (μ g) trávení EcoRI/XbaI; Plavecká dráha 12, DNA:EPCB číslo šarže CA (μ g) rozkladu EcoRI/XbaI; Plavecká dráha 13, DNA:EPCB číslo šarže CA (μ g) rozkladu EcoRI/XbaI; Plavecká dráha 14, DNA:EPCB číslo šarže CA (μ g) rozkladu EcoRI/XbaI; Plavecká dráha 15, DNA:MCB (μ g) trávení EcoRI/XbaI; Plavecká dráha 16, DNA:EPCB číslo šarže CA (μ g) rozkladu EcoRI/XbaI; Plavecká dráha 17, DNA:EPCB číslo šarže CA (μ g) rozkladu EcoRI/XbaI; Plavecká dráha 18, pozemek DNA:EPCB číslo CA (μ g) rozkladu EcoRI/XbaI.
Obrázek 24 popisuje schéma kulturní metody v produkčním měřítku 25 a L produkuje hromadnou produkci rekombinantního proteinu v bioreaktoru.
Obrázek 25 ukazuje reprezentativní chromatografické spektrum vhodnosti systému NGNA a NANA v čase ~ minut je NGNA a pík v čase ~ minut je NANA.
Obrázek 26 ukazuje reprezentativní chromatografické spektrum molekuly CTLA4-Ig, která zahrnuje monomerní hydrolýzu SEQ ID NOPeak v čas ~ minut je rozpouštědlo v čase ~ minut je v čase ~ minut je v čase ~ minut je NANA degradována, je vyráběna hydrolýzou planimetrového pole NANA NANA a degradována je podíl na výpočtu poměru mol NANA.
Obrázky 27 A, 27B a 27C ukazují MALDI spektrum peptidu CTLA4-Ig ition pro Cys, který obsahuje SEQ ID NO:2 MALDI spektrum CTLA4-Ig trypsázy/chymotrypsinu 27 A ukazuje vláknové peptidové spektrum, které ilustruje cysteinyl 27 B ukazuje spektrum vláknového peptidu po redukci a potvrzuje, že je modifikováno na Cys Místo trvá 27 C ukazuje alkanizaci redukčního peptidu, a to potvrzuje, že cysteinylizace je na Cys Místo probíhá.
Obrázek 28 představuje schéma klonu, které se používá k výrobě nosičů 3 s restrikčním enzymem NaeI, obsahuje Kb fragment replikačního orginu CMV promotoru, gen ampicilinové rezistence a střevní bakterie () s 2-dhfr štěpením s restrikčním enzymem PvuII a BamHI, obsahuje Kb fragment promotoru SV40 a gen dhfr s separací, a provést příkaz k ukončení proplachu pro výrobu pcSD, 2 fragmenty jsou obrázek plazmidu pcSD je zobrazen ve spodní části tohoto obrázku.
Obrázek 29 představuje klon schéma, které se používá k výrobě expresních vektorových štěpů s restrikčním enzymem EcoRV a -huCTLA4-Ig se štěpí s restrikčním enzymem HindIII, proplachuje konec a následně se štěpí s restrikčním enzymem XbaI, aby se oddělil řád KbhuCTLA4-Ig za vzniku pcSDhuCTLA4-Ig, fragment CTLA4-Ig je připojen k nosiči pcSD obrázku plazmidu pcSDhuCTLA4-Ig je zobrazen ve spodní části tohoto plazmidu linearizace a transfekce v vaječníku čínského křečka celI, který neobsahuje Funkční plazmid DHFR e obsahuje funkční gen DHFR, stabilní transfektant lze vybrat na základě buňky CTLA4-Ig má a obsahuje následující expresní kazetu: sekvenci (tj. SEQ ID NO:1) promotoru CMV, lidský CTLA 4 molekuly kódující Ig (huCTLA4-Ig) a ze sekvence ocasu kyseliny polyadenylové BGH.
Obrázek 30 ukazuje, že elektroforogram je popsán jako relativní fluorescenční jednotka (RFU) k času (minutě) elektroforogramu aminomonosa vhodnosti systému.
Obrázek 31 ukazuje, že elektroforogram neutrální monosy vhodnosti systému je popsán jako relativní fluorescenční jednotka (RFU) k času (minutě).
Obrázek 32 představuje, že má CTLA4 peptidu značky A29YLE Tryptický peptid na obrázku 23 odpovídá peptidu značky.
Obrázek 33 ukazuje CTLA4 A29YLE Obrázek A hybridizační analýzy RNA popisuje malovanou sefarózu bromace druhého pyridinu a kde plavecký pruh M je značka RNA; Plavecká dráha 1 je celková CHO RNA; Plavecká dráha 2 je celková MCB RNA; S plaveckou dráhou 3 je celkový EPCB obrázek B je odpovídající autoradiogram (ARGM) a kde plavecká dráha M je značka RNA; Plavecká dráha 1 je celková CHO RNA; Plavecká dráha 2 je celková MCB RNA; S plaveckou dráhou 3 je celková EPCB RNA.
Obrázek 34 A-C popisuje chromatografii s vyloučením velikosti spektrum, a díky tomu se dimer CTLA4 A29YLE -Ig rozlišuje mezi druhy s vysokou a nízkou molekulovou hmotností.
Obrázek 35 ukazuje CTLA4 s Coomassieho modrým barvivem A29YLE SDS-PAGE of-Ig (redukční a neredukovaný typ) ng pruh 1 aplikace molekulového hmotnostního markeru vzorku; Plavecká dráha 2,7 a 12 je prázdná; Plavecká dráha je vzorek CTLA4 A29YLE -Ig (redukovaná forma); Plavecká dráha je CTLA4 A29YLE-Ig vzorek (neredukovaný typ).
Obrázek 36 ukazuje stříbrně natřený CTLA4 vynucení A29YLE SDS-PAGE of-Ig (redukční a neredukovaný typ) ng pruh 1 aplikace molekulového hmotnostního markeru vzorku; Plavecká dráha 2,7 a 12 je prázdná; Plavecká dráha je vzorek CTLA4 A29YLE -Ig (redukovaná forma); Plavecká dráha je CTLA4 A29YLE-Ig vzorek (neredukovaný typ).
Obrázek 37 popisuje použití neredukovaného CTLA4 trypsinázy a Kombinované trávení quimotrázou A29YLE Peptidová postava - Ig.
Obrázek 38 popisuje použití neredukovaného CTLA4 kombinovaného trávení trypsinázy a elastoseru A29YLE Peptidový obrázek -Ig.
Obrázek 39 je graf popisující, že pacient, který anti-CTLA 4-Ig nebo anti-CTLA-4 popsané v příkladu 32 výše, používá měření A a B měří na kompletní molekulu CTLA4-Ig (CTLA-4 a Ig část) a protilátkovou odpověď CTLA-4 pouze částečně.
Obrázek 40 potvrzuje, že clearance rate podle imunogenicitního stavu je distribuován a synoptický diagram objemu centrálního kompartmentu.
Obrázek 41 je grafické znázornění, které potvrzuje u opice použití léku v dávce 10 mg/kg při výrobě metodou předkládaného vynálezu spolu s přehledem průměrné (SD) koncentrace séra CTLA4-Ig v minulé době.
Obrázek 42 je grafické znázornění vyloučení velikosti chromatografický (SEC) chromatogram A albumenu (MAbSelect) purifikace z CTLA4-Ig materiálu kontrastu a depolymerizace.
Na obrázku 43 je grafické znázornění materiálu, který se provádí depolymerizací N glykanové analýzy (ii) ve srovnání s kontrastem (i).
Obrázek 44 popisuje grafické znázornění průměrné koncentrace séra CTLA4-Ig [μ g/ml] v čase (po 71 dní).
Na obrázku 45 je znázorněna relativní fluorescenční jednotka (RFU) k času (minutě) elektroforogramu neutrální monosy.
Obrázek 46 ukazuje, že elektroforogram aminomonosy je znázorněn jako relativní fluorescenční jednotka (RFU) k času (minutě).
Obrázek 47 představuje přibližně obsahující CTLA4 SEQ ID NO:4 A29YLE Srovnání N spojení oligosacharidů sacharidový přehled sacharidů z-Ig e 4 druhů oligosacharidových strukturních teritorií, přičemž strukturní doména I zahrnuje nesialylovaný druh a doména II, III a IV zahrnují mono-sialylanované, dvojitě a tři sialylované druhy.
Obrázek 48 je a CTLA4 A29YLE -Ig1: grafické znázornění kapilární elektroforézní separace 1 smíšeného hlavního píku Obrázek
49 je CTLA4 hydrolýzy A29YLE Chromatogram materiálu Ig, kde pík NANA byl pozorován v čase minut.
Obrázek 50 je znázorněn v několika různých sacharidových strukturách spojení N, které se nacházejí v řetězcích savčích proteinů, jsou sdíleny společná struktura jádra, která obsahuje 2 GlcNAc a 3 zbytky manózy.
Obrázek 51 je grafickým znázorněním popisu, který má být vystaven jako CTLA4-Ig sialylované funkce glykoproteinu (NANA than) (AUC).
Obrázek 52 je grafickým znázorněním popisu k vystavení jako CTLA4-Ig funkce přehledu sacharidů CTLA4-Ig (AUC). Velké množství píků je produkováno aniontovou pryskyřicí HPLC a rozkládá se na 4 druhy nebo 5 druhů strukturní uralové domény 1 a 2 je hlavně struktura asialoizace a mono-sialylované a strukturální doména 3 a 4 jsou hlavně dvě a tři sialylované struktury.
Obrázek 53 představuje, že má CTLA4 peptidu značky A29YLE Tryptický peptidový obrázek 56 odpovídá peptidu značky.
Obrázek 54 představuje srovnání N spojení oligosacharidů sacharid přehled sacharidů o molekule CTLA4-Ig, která obsahuje SEQ ID NOObserve 4 druhy území oligosacharidové struktury, přičemž strukturní doména I zahrnuje nesialylovaný druh, a doména II, III a IV zahrnují mono-sialylace, double-sialylated a tři sialylované druhy.
Obrázek 55 A-D je CTLA4-Ig výrazu podle HPAEC-PAD a grafické znázornění reprezentace oligosacharidů přehled peptidů T5, T7 a T
Obrázek 56 je grafické znázornění oligosacharidů přehled známek popisujících odvozených z CTLA4-Ig příspěvku PGC (Hypercarb).
Obrázek 57 popisuje grafické znázornění farmakokinetických dat, které jsou prezentovány na AUC opice v ose Y a jako ze strukturní domény I přehledu sacharidů na ose X a procentu glykosylace vázané na N, jak je znázorněno v Spolu s procentuálním nárůstem (a procentem domény II I, IV a V se snižuje) strukturální domény I a II, míra odbavení negativní kontrola, mají nízkou sialickou CTLA4-Ig a odstraněnou velmi lze chápat, že varianta CTLA4-Ig, LEA (CTLA4-Ig A29YLE -Ig) být zahrnuta do tohoto grafického znázornění.
Tepny a žíly značkují N spojovacího sachatogramu N, který obrázek 58 A a 58B popisuje jako vypouštění z CTLA4-Ig spojovacího sacharidu (jak je odvozeno mezi provedeními 3,44,22 a 37 například tyto metody). Tepny a žíly označují mezi Obrázek 58 A přichází pohodlná analýza nepřidání CTLA4-Ig, který produkuje v kultivační metodě jiné semi-laktózy v es a žíly značka mezi Obrázek 58 B přidal semi-laktózu opravdu v procentech ukazuje N spojení sacharidu v každé strukturální doméně je ve vložení tabulky.
Značka tepen a žil na sachatogramu N spojení N, který obrázek 59 popisuje pro vypouštění z CTLA4-Ig spojení sacharid (jak je odvozeno mezi provedeními 3,44,22 a 37 například tyto metody). Když přichází pohodlný 8. den, to v substrátu, přidává analýzu CTLA4-Ig, která produkuje v kultivační metodě tepen a žil značka přichází pohodlná analýza nepřidání CTLA4-Ig, která produkuje v kultivační metodě jiné semi-laktózy v procentech ukazuje N spojení sacharidu v každé strukturní doméně, je ve vkládací tabulce.
Značka tepen a žil na sachatogramu N spojení N, který obrázek 60 popisuje pro vypouštění z CTLA4-Ig spojení sacharid (jak je odvozeno mezi provedením 3,44,22 a 37 například tyto metody). Když přichází pohodlný 14. den, to v kultuře, přidává analýzu CTLA4-Ig, která produkuje v kultivační metodě tepen a žil značka přichází pohodlná analýza nepřidává CTLA4-Ig, který produkuje v kultivační metodě jiné semi-laktózy v procentech ukazují N spojení sacharidu v každé strukturální doméně je ve vkládací tabulce.
Značka tepen a žil na sachatogramu spojení N N, který obrázky 61 A a 61B popisují k vybití z CTLA4-Ig spojení sacharid (jak se odvozuje mezi provedeními 3,44,22 a 37 např. tyto metody). Obrázek 61 A přichází pohodlná analýza nepřidání CTLA4-Ig, která produkuje v kultivační metodě semilaktózy, a obrázek 61 B je z analýzy, při které přidání semilaktózy 14. den času v tepnách a žilách značka přichází pohodlná analýza nepřidání CTLA4-Ig, která produkuje v kultivační metodě jiné semilaktózy v procentech ukazuje spojení N sacharid v každé strukturní doméně je při vkládání stůl.
Značka tepen a žil sachatogramu spojení N N, který obrázek 62 popisuje pro vypouštění sacharidu spojení CTLA4-Ig (jak je odvozeno mezi provedením 3,44,22 a 37 například tyto metody). Tato značka tepen a žil je odvozena od materiálu CTLA4-Ig, který se získává z promývacího kroku QFF pošty, vyrábí část (řez) s nízká sialická CTLA4-Ig e se značkou tepen a žil, která ukazuje na obrázcích 61,60 a 59, relativní množství strukturální domény I a II se zvyšuje a procenta domény II I a IV ukazují sacharid spojení N v každé strukturální doméně je ve vkládací tabulce.
Obrázek 63 ukazuje tryptický peptidový obraz CTLA4-Ig, poukazuje na vymývání T8, když je přední konec rozpouštědla, a vymývání T9, když je rameno T27.
Na obrázku 64 je uvedeno, že exprese odpovídá úplnému hmotnostnímu spektrálnímu grafickému znázornění z glykopeptidu T8 CTLA4-Ig.
Na obrázku 65 je uvedeno, že exprese odpovídá kompletní hmotnostní spektrální grafické reprezentaci z glykopeptidu T9 CTLA4-Ig.
Obrázek 66 je exprese odpovídající grafickému znázornění z dat MALDI-TOF peptidového fragmentu T9 CTLA4-Ig.
Na obrázku 67 A-B je popsáno spektrum iontové chromatografie a hmotnost spektrum z oxidace CTLA4-Ig a přírodního tryptického peptidu.
Na obrázku 68 je popsán obecný přehled oligosacharidů spojení N (strukturní doména I, II, III, IV a V a pík 1A a 1B v 5% střední hodnotě šarže). Pík 1A, 1B a 1C představuje, že kyselina sialová N, která se odděluje od G0, G1 a G2, se připojuje k oligosacharidu, údaje z tohoto přehledu v tabulce k provedení
Obrázek 69 popisuje izoelektrofokusační gel je charakterizován tím, že:
Obrázek 70 popisuje reprezentativní zprávu o kvantitativní analýze izoelektrofokusačního gelu a údaje o provádění gelu jsou následující:
Obrázek 71 A je znázorněn v obecném 20 μ L vstřikování kritéria vhodnosti systému na sloupcích TOSO HAAS SWXL, které jsou vybaveny krytem 71 B, je znázorněno v CTLA4-Ig na sloupku TOSO HAAS SWXL, který je vybaven ochranným sloupem s odkazem na vstřikování 20 μ L materiál.
Obrázek CTLA4-Ig získává příklad obrázku číslicí SDS-PAGE analýzy polyakrylamidové () gelové elektroforézy Coomassieho modrého barvení